短波單胞菌說明書

菌種的培養：

、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見圖） 菌種制備 ，其中()～(4)為孢子制備過程。

4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數采用大米、小米之類的天然培養基）。

5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養4天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至0%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續使用半年左右。

放線菌孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28～37℃培養5～4天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。

6、如果有些菌種不產孢子，如赤霉素產生菌或產孢子不多的，則可采用搖瓶(5)液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐(7)的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在0%～20%。

低溫存法：

①簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過～2個月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3～4個月；②液氮超低溫保存法，將生長穩定期的細胞懸浮在0%甘油或其他低冰點液體中，密封于安瓿管內，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時，即可置于-50～-96℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長期保存。

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短波單胞菌 培養溫度：  35-37℃ 英文名稱：Short wave single cell 培養保藏法:培養后于4—6℃冰箱內保存。

脫水存法：

①沙土保存法，能產孢子的細菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內,裝置高度為cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經真空抽干，外觀呈松散狀態,于4℃冰箱保存，保存期可達5～7年。

② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑（一般用脫脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管內于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達5～0年之久。

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。