植物維生素D（VD）ELISA免費代測試劑盒說明書
 
【中文名稱】：植物維生素D（VD）ELISA免費代測試劑盒
【產品規格】：96T/48T。
【保存條件】：2-8℃低溫保存
【保質期】：6個月，所有試劑盒均提供批次。
【試劑盒成分】：酶標板，試劑，標準品等。ELISA試劑盒檢測范圍：人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動物細胞因子、植物細胞因子、骨代謝、細胞凋亡、激素內分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。 主要用于科研方面，不用于臨床診斷?？梢杂糜跈z測各種指標。
植物維生素D（VD）ELISA免費代測試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中維生素C(VC)水平。用純化的維生素C(VC)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入維生素C(VC)，再與HRP標記的維生素C(VC)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的維生素C(VC)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中維生素C(VC)濃度。 
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樣本處理及要求
 
1.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
 
2. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
 
3. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
 
操作步驟
 
1.標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL
 
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
 
3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
 
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
 
5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
 
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
 
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
 
8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
 
9.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項
 
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
 
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
 
3. 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
 
4. 請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔di一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
 
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 
6. 底物請避光保存。
 
7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
 
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
 
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
 
10. 試劑盒2-8℃冷藏，保質期6個月。